ניתוח איכותי ל-HIV. בדיקת DNA ל-HIV למבוגרים וילדים: מהות המחקר, היקף השימוש. ניתוח PCR עבור HIV - מתי לקחת אותו, למה ובאיזה מסגרת זמן

אחד ה מחלה רצינית, שעדיין לא נרפא, נגרמת על ידי נגיף הכשל החיסוני האנושי.

לא קל לזהות פתוגן בגוף: נכון להיום משתמשים בשיטות מחקר בודדות לכך.

אחת הבדיקות הללו היא תגובת שרשרת פולימראז (PCR).

כדי להבין את בית המשפט של שיטת תגובת שרשרת הפולימראז, אתה צריך לזכור את המוזרות של מבנה התאים מהקורס בבית הספר.

כל תא חימכיל חלבון ושני סוגים של חומצות גרעין: DNA ו-RNA. הם המבנים התאיים החשובים ביותר מכיוון שהם מכילים מידע גנטימקודד בצורה מיוחדת.

קוד ה-DNA הוא רצף קפדני של מיקרו-מבנים היוצרים שרשרת ארוכה.

התייחסות!היכולת של חומצת גרעין להתרבות עצמה משמשת כבסיס ל-PCR.

כאשר הנגיף חודר לתאים בריאים, הוא הורס גדילי DNA.

במקרה זה, התא לא יכיל עוד שרשראות שלמות, אלא רק שברים קטנים - נוקלאוטידים. בנוסף, אפילו החלקיקים הקטנים ביותר של הנגיף יהיו גלויים.

על זיהוי שרשראות DNA פגומות ותאים שיוריים נבנית שיטת תגובת שרשרת הפולימראז.

ישנם שני סוגים של אבחון PCR:

• איכות. מתאים למי שהאבחנה שלו לא מאושרת: זה פשוט מראה אם ​​הנגיף קיים בתאים.
• כמותי. החולה מקבל את התוצאה "DNA של הנגיף אינו מזוהה", כלומר היעדר HIV, או מידע על נוכחות הפתוגן, כלומר האדם נגוע ב-HIV.

אם יש אבחנה מאושרת, מוקצה ניתוח כמותי. בעזרתו נקבע מספר עותקי ה-RNA (DNA) של הנגיף בדם (תאים). ניתוח כמותי מאפשר להעריך את יעילות הטיפול בנגועים ב-HIV, כדי לקבוע את חומרת המחלה, התקדמותה.

אילו שיטות אבחון יכולות לזהות זיהום ב-HIV מתוארות בסרטון:

יתרונות וחסרונות של שיטת אבחון זו

כמו לכל אמצעי אבחון, ל-PCR יש יתרונות וחסרונות.

יתרונות השיטה כוללים:

• אמינות גבוהה.בעזרת PCR ניתן לזהות את השרידים הקטנים ביותר של הנגיף, ההסתברות לגילוי הפתוגן מגיעה ל-80% 4-5 ימים לאחר ההדבקה, 100% - 14 ימים לאחר ההדבקה. לפיכך, הדיוק הגדול ביותר מושג כאשר חוקרים את ה-DNA של נגיף בתאי דם: ניתן לזהות וירוס כאשר מספרו הוא 1-5 עותקים למיליון תאים.
• אפשרות לשימוש בחומרים ביולוגיים שונים(רוק, שתן, יזע ודמעות אינם מתאימים ל-PCR, אך ניתן להשתמש בדם, זרע והפרשות איברי המין מנשים).
• אפשרות לבצע את הניתוח על מחלות שונות בבדיקה אחת.באמצעות PCR, אתה יכול לזהות HIV, כלמידיה, הרפס, cytomegalovirus, ureaplasma, mycoplasma, זיבה, trichomoniasis, toxoplasmosis.
• מהירות מהירה של קבלת תוצאות.קיימת בדיקת PCR אקספרס המאפשרת לגלות את תוצאות האבחון תוך מספר שעות.
• רגישות גבוהה: PCR, בניגוד למשל, ELISA, עוזר לזהות את הנגיף כבר בשבועות הראשונים לאחר ההדבקה.
• אפשרות לקבלת תוצאות תוך מספר ימים לאחר ההדבקה.כאשר נדבק, ניתן לקבוע את הנגיף לאחר 5-14 ימים, בעוד ש-ELISA רצוי לבצע רק לאחר 6 שבועות.
• אין הגבלות גיל.ניתן לבצע PCR גם במבוגרים וגם בילדים מרגע הלידה.

המאפיין העיקרי של ניתוח PCR הוא שהוא אינו מזהה נוגדנים לנגיף, אלא את הנגיף עצמו.

יש רק כמה חסרונות מול היתרונות:

• עלות גבוהה.
• ההסתברות לקבל תוצאות חיוביות שגויות היא כ-20%. בדרך כלל זה קורה בשל אשמת הצוות (טעויות באיסוף או הובלה של החומר הביולוגי, בחקר החומר הביולוגי ופרשנות התוצאות).
• הצורך בשימוש בציוד היי-טק מתקדם, שרק חלק מהמרפאות מצוידות בו.

תשומת הלב!ברור שהיתרונות של הטכניקה הרבה יותר גדולים מהחסרונות. חשוב במיוחד שבעזרת PCR ניתן יהיה לזהות את המחלה בשלב ההתפתחות הראשוני ולהתחיל בטיפול בזמן.

תוצאת ניתוח ה-PCR יכולה להיות חיובית כבר 14-21 ימים לאחר זיהום אפשרי. אבל אם הניתוח שלילי, זה לא מבטיח היעדר זיהום. עדיף לבצע בדיקת אישור עם דבש ELISA לאחר שבועיים.

כיצד מתבצעת בדיקת PCR ל-HIV מתוארת בסרטון:

מי מוקצה?

קודם כל, PCR נקבע לחשוד ב-HIV. הטכניקה יכולה להעיד גם על גילוי מחלות מין, מחלות תורשתיות.

התייחסות!אבחון PCR מתבצע לעיתים קרובות על ידי אדם שלא הראה סימפטומים של המחלה, אך יש ספקולציות וחשש לגבי זיהום אפשרי, למשל, לאחר קיום יחסי מין לא מוגנים, עירוי דם לאחרונה, מגע עם אדם נגוע.

למי עוד מראים את הבדיקה?

• אנשים שנבחנו חיובי ל-ELISA פעמיים. PCR יאפשר לך לקבוע את האבחנה הסופית.
• תורמים שמתכננים לתרום דם.
• אנשים שאצלם אימונובלוטינג אישר את האבחנה. סיכה חיסונית היא שיטה לאבחון איידס ומתבצעת בדרך כלל בשילוב עם PCR.
• אנשים שנמצאים בשלב הטיפול במחלות הנגרמות על ידי HIV. PCR מאפשר לך להעריך את יעילות הטיפול.
• יילודים שאמם נשאית HIV (העברה של הנגיף מתרחשת בכ-30% מהמקרים). כבר 2-3 שבועות לאחר הלידה, ניתן לקבוע האם אירע זיהום.

חלק מהאנשים נבדקים כאמצעי מניעה, אך זה נדיר מכיוון שעלות בדיקת PCR גבוהה.

כמה זמן נמשך הניתוח והיכן ניתן לבצע אותו?

ניתוח PCR עבור HIV מתבצע במעבדה.

דגימת הדם עצמה אורכת 5-10 דקות, והתוצאות מוכנות למחרת.

בעת בחירת אבחון אקספרס (לדוגמה, במעבדות "Invitro" או "Hemotest"), פרשנות התוצאות על ידי מומחה אורכת שעתיים בלבד.

במרפאות פרטיות ניתן לבצע אבחון, אם רוצים, בעילום שם. לשם כך, עליך לדווח על כך במהלך ביקור אישי: לכל מטופל מוקצה מספר סידורי וניתנת לו גישה לחשבון אישי. אז אדם יכול לגלות את התוצאות גם ללא ביקור שני במעבדה.

מהימנות התוצאות של מחקר ה-PCR מתוארת בסרטון:

עלות מחקר

אבחון PCR אינו זול, מכיוון שהם דורשים ציוד מתקדם מסוים, כמו גם ידע מיוחד.

הציוד זמין רק בחלק מהמעבדות הרפואיות, מה שמאפשר לך להגדיר עלות גבוהה של ניתוח.

המחיר הממוצע של מחקר הוא 3000-5000 רובל. באזורים מסוימים, העלות אינה עולה על 1500-2000 רובל.

מכיוון שקיימת אפשרות לתוצאות חיוביות שגויות ושליליות שגויות, או שהאדם פנה מוקדם מדי (הנגיף עדיין לא שבר את מבנה ה-DNA, אבל כבר קיים בגוף), ייתכן שתידרש בדיקה שנייה.

העלות הגבוהה נובעת גם מהעובדה שדרושים מספר רכיבים לאבחון:

1. מקטע DNA (מטריקס) המיועד להגברה;
2. שני פריימרים;
3. פולימראז - מרכיב פעיל מבחינה כימית המאיץ את העלייה במספר החלקיקים הנגיפים באופן אקספוננציאלי;
4. Deoxyribonucleoside triphosphates;
5. חלקיקים טעונים של מגנזיום דו ערכי;
6. פתרון מיוחד בו מתבצע תהליך הפילמור. תמיסה זו נועדה לשמור על רמת חומציות מתאימה, ריכוז מלחים, כמות מגנזיום בנוזל.

כמו כן, המחקר דורש כמות קטנה של ג'לי נפט: הוא מכיל שומנים ורתיחה בטמפרטורה גבוהה, מה שמגן על הדגימה הנחקרת מפני התחממות יתר.

ביצוע ניתוח

דם, זרע והפרשות מהנרתיק מתאימים לניתוח. בְּדֶרֶך כְּלַל, לעתים קרובות להשתמש בדם ורידי.

דגימת דם מתבצעת בבוקר על קיבה ריקה.

בנוסף, עליך להתכונן לניתוח:

• 2-3 ימים לפני האבחנה, יש להוציא מזון שומני מהתזונה.
• אלכוהול אינו נכלל 1-2 ימים לפני הניתוח.
• שבועיים לפני הניתוח, עליך להפסיק לקחת תרופות מעוררות חיסון.
• הארוחה האחרונה צריכה להתרחש לא יאוחר מ-8 שעות לפני תרומת הדם.

בעת נטילת דם מווריד, מטפלים בכיפוף הפנימי של המרפק בתמיסה מיוחדת, ולאחר מכן חודר המומחה את העור, מניח את המחט של מזרק הווריד ולוקח את הכמות הנכונה של דם. לאחר מכן מסירים את המחט, המקום מטופל שוב באלכוהול, המטופל מקבל צמר גפן.

על המטופל לכופף זמנית את הזרוע כדי לעצור את הדימום. אם אדם מרגיש טוב, הוא יכול מיד ללכת הביתה. עם סחרחורת, בחילות והתעלפות, הוא מקבל עזרה ראשונה.

עוזר המעבדה מניח את החומר הביולוגי שהתקבל בבקבוק סטרילי ושולח אותו לאבחון. המומחה מערבב את החומר הביולוגי המפוצל בכור מיוחד עם אנזימים המסנתזים זיהומים שונים.

אם יש מעט מאוד חלקיקי וירוס בדם, מספרם גדל בחדות בעת אינטראקציה עם אנזימים: הריאגנטים מתחברים עם ה-DNA של הנגיף ומשכפלים אותו.

הניתוח מתבצע במספר שלבים, מכיוון שחלוקת המולקולות מתרחשת באופן אקספוננציאלי. מתא אחד מסתבר 2, מ-2 - 4 וכן הלאה.

בניתוח חוות דעת וביקורות של רופאים, אנו יכולים לומר בביטחון: נכון לעכשיו, אבחון PCR הוא השיטה המדויקת ביותר לבדיקת הידבקות ב- HIV.

התייחסות!באמצעות הניתוח ניתן לקבוע את נוכחות הנגיף בגוף תוך מספר ימים לאחר ההדבקה, גם אם מספר המבנים הנגיפים הוא 1-5 יחידות בלבד למיליון תאים. עם זאת, אל תשכח את החסרונות של השיטה, למשל, את הסבירות לקבל תוצאות חיוביות שגויות.

עם זאת, PCR נותרה אחת הבדיקות הבודדות המאפשרות לך לאבחן את המחלה בזמן ולהתחיל בטיפול.

עבור רוב הנשים והגברים, מחלה זו המועברת במגע מיני היא המפחידה ביותר. מסיבה זו, לאחר מערכת יחסים אינטימית מקרית ללא אמצעי מניעה מחסום, כמו גם עם החלפה תכופה של בני זוג מיניים ולאחר פעולות כירורגיות, אדם סביר חווה עירנות מסוימת. הדרך האמינה ביותר לבירור היא ללכת למרפאה ולבצע בדיקת PCR ל-HIV.

ניתן להשתמש בבדיקת הדם כדי לקבוע את האינדיקטורים הבאים:

• הכחשה / אישור על הימצאות HIV בתקופה הסמויה (בשבועות הראשונים לאחר ההדבקה לא מתגלים נוגדנים בבדיקות ELISA עקב היעדרם או ריכוז נמוך מדי).
• קביעת הגנוטיפ של HIV-1, HIV-2.
• זיהוי הסטטוס בילדים שנולדו לאמהות נשאיות (נוגדנים ל-HIV הרבה זמןנמצאים בכל הילדים שנולדו לנשים נגועות ב-HIV. רצוי לקבוע את ה-DNA של הנגיף בילדים מתחת לגיל 48 שעות חיים, 1-2 חודשים, 3-6 חודשים).
• תוצאות שווא-שליליות, חיוביות שגויות ומפוקפקות של בדיקות ELISA.
• אבחון כמות ה-HIV וניטור של שינויים בעומס הנגיפי בדינמיקה (במקרה של אבחנה מבוססת של איידס, ניתוח PCR משמש לפרוגנוזה, ניטור דינמי וניטור של טיפול מתמשך).

מחיר בדיקת PCR ל-HIV

שיטות	סוג ניתוח PCR	מחיר
DNA מסוג HIV	אֵיכוּתִי	2 750
RNA מסוג HIV מסוג 1 בפלזמה	כמותי	8 850
HIV RNA, קביעת עמידות ל-HIV לפרוטאזות ולמעכבי טרנסקריפטאז הפוכים (בסדר עם "HIV RNA בפלזמה")	-	16 550
HIV RNA, בדיקת עמידות ל-HIV למעכבי אינטגראז (מוזמן עם "HIV RNA בפלזמה")	-	16 950
HIV-1 RNA/DNA, קביעת טרופיזם של HIV	-	16 950
מחקר מולטיפריים
הפטיטיס C RNA + הפטיטיס B DNA + HIV מסוג 1 ו-2 RNA (שיטה רגישות במיוחד)	אֵיכוּתִי	3 800

ניתוח PCR ל-HIV - מתי זה נעשה, למה ובאיזה שעה

1. DNA של HIV.ניתן להשתמש באבחון DNA של נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) כדי לזהות זיהום אפשרי מוקדם לאחר אירוע בסיכון גבוה (בדיקות דם נלקחות כבר 10 ימים לאחר זיהום אפשרי). עם זאת, על מנת לשלול לחלוטין זיהום, יש צורך לבצע לאחר מכן מחקר שני ואבחון ELISA בשבועות 4 ו-12.
   תוצאות ניתוח: HIV DNA ( ניתוח איכותי) - "לא נמצא" או "נמצא". במקרה האחרון, נדרשים מחקרים נוספים חוזרים על מנת לאשר הידבקות ב-HIV. אם התוצאה שלילית, אך קיים סיכון גבוה לזיהום, נדרשת בדיקה שנייה - תרומת דם ב-PCR או ELISA לאחר זמן מה.
2. HIV RNA.הקביעה הכמותית של HIV RNA על ידי PCR (מה שמכונה "עומס ויראלי") היא אחד המדדים להערכת הפרוגנוזה של מהלך הזיהום ב-HIV והאינדיקטור המוקדם ביותר ליעילות הטיפול האנטי ויראלי. הבדיקה מיועדת למעקב אחר מהלך המחלה, להחלטה האם להתחיל בטיפול ולהערכת יעילותה.
   ניתן להשתמש במחקר של HIV RNA על ידי PCR במבוגרים עם אבחנה מהימנה מוקדמת של זיהום אפשרי לאחר אפיזודה בסיכון גבוה (כ-7-10 ימים לאחר זיהום סביר). נוכחות של טיטר גבוה של HIV RNA בהיעדר נוגדנים מאפשרת אבחנה של זיהום חריף של HIV. עם זאת, כדי להבהיר את האבחנה, יש צורך לבצע מחקר חוזר ואבחון ELISA תוך 1 ו-3 חודשים.
   מסירה של PCR HIV RNA בנשים הרות עם זיהום זה 3-4 שבועות לפני תאריך הלידה הצפוי נועדה לפתור את סוגיית אופן הלידה (באמצעות תעלת הלידה הטבעית או בניתוח קיסרי).
   תוצאות ניתוח: HIV מסוג 1 HIV RNA (ניתוח כמותי)- "לא זוהה" (זה נורמלי).
3. עמידות ל-HIV.ניתוח לקביעת העמידות של HIV למעכבי פרוטאז ומעכבי טרנסקריפטאז הפוך מיועד לחולים נגועים ב-HIV עם טיפול לא יעיל, כמו גם במהלך זיהום חריף לפני התחלת טיפול אנטי-ויראלי. המחקר מאפשר לקבוע את העמידות של HIV לתרופות. בהתבסס על תוצאות הניתוח, המומחה למחלות זיהומיות לומד על נוכחותן של מוטציות עמידות למעכבי פרוטאז, מעכבי נוקלאוזידים ולא נוקלאוזידים, וכן מידע על כל מיקום של חומצת אמינו הקשורה למוטציה של עמידות לתרופה.
4. אבחון רב-פריים מקיף:קביעה איכותית של RNA של נגיף הפטיטיס C / DNA של נגיף הפטיטיס B / נגיף כשל חיסוני אנושי (HIV) מסוג 1 ו-2 RNA (שיטה רגישות במיוחד). הניתוח מאפשר לאבחן זיהום ב-HIV, דלקת כבד נגיפית C ו-B דייטים מוקדמים. המחקר מיועד לגילוי מוקדם של דלקת כבד נגיפית B ו-C, HIV מסוג 1/2 אצל אנשים בסיכון. גילוי נגיפי DNA או RNA מעיד על זיהום.

תנאי המוכנות של בדיקות דם אלו - מ-3 עד 7 ימים קלנדריים. לעבור ניתוח PCR איכותי וכמותי לאבחון זיהום ב-HIVבמוסקבה זה אפשרי במרכז הרפואי שלנו. דגימת דם מדי יום, בין השעות 10-00, כולל

תיאור

תגובת שרשרת פולימראז (Polymerase chain reaction, PCR, PCR) הומצאה בשנת 1983 על ידי הביוכימאית האמריקאית Carey B. Mullis. בשנת 1993 הוענק לו פרס נובל על תגלית זו.

כיום, תחומי היישום של PCR as שיטה מודרנית ביולוגיה מולקולריתרחב במיוחד. לאבחון PCR יש מקום מיוחד בפרקטיקה הרפואית. והסיבה לכך פשוטה למדי: תגובת שרשרת הפולימראז הופכת את הבלתי אפשרי לאפשרי.

לעתים קרובות, אבחון PCR מתואר באופן פיגורטיבי כשיטה שבאמצעותה ניתן למצוא מחט בערימת שחת ולאחר מכן לבנות ערימה של מחטים אלו. "מחט" היא חתיכה זעירה מהחומר הגנטי של התא (DNA או RNA).

לפיכך, גילוי שיטה זו הוא אחד האירועים הבולטים בתחום הביולוגיה המולקולרית בעשורים האחרונים. התפתחות שיטת ה-PCR אפשרה לאבחון רפואי בכלל לעלות לרמה חדשה מבחינה איכותית.

יסודות PCR

בסיס השיטה הוא העתקה (הגברה) סלקטיבית מרובה של מקטע DNA מסוים על מנת לקבל כמות כזו של חומר גנטי שתספיק לזיהוי ויזואלי. במקרה זה, רק אזור DNA נתון מועתק שוב ושוב (מוגבר), בתנאי שהוא קיים בחומר הביולוגי הנחקר.

בנוסף, המחקר, בנוסף להגדלת מספר העותקים של קטעי DNA, מאפשר מניפולציות אחרות עם חומר גנטי. לכן, השיטה נמצאת בשימוש נרחב ב מחקר מדעי, פרקטיקה ביולוגית ורפואית: באבחון מחלות זיהומיות ותורשתיות, באיתור מוטציות, גנוטיפ, קביעת אבהות, זיהוי אישי וכו'.

PCR באבחון מחלות זיהומיות

כיום, אבחון PCR של זיהומים הוא אחת משיטות המעבדה הקליניות המדויקות, הרגישות והיעילות ביותר. יתרה מכך, מגוון הפתוגנים הניתנים לזיהוי הוא כמעט בלתי מוגבל - תתפתח מערכת בדיקה לניתוח PCR של הפתוגן הרצוי.

בשל רגישותו הגבוהה, PCR מאפשר לזהות את הפתוגן גם עם תכולתו המינימלית (כלומר, רק מולקולות בודדות מה-DNA שלו נמצאות בחומר הביולוגי הנחקר).

PCR מזהה פתוגנים מחלות מדבקותכאשר לא ניתן לעשות זאת בשיטות אחרות (אימונולוגיות, תרבותיות, מיקרוסקופיות). לכן, עבור מספר גורמים זיהומיים, שיטת תגובת שרשרת הפולימראז הפכה ל"תקן הזהב", היא נבדקה בזמן ונבדקה קלינית. באבחון מעבדתי מודרני של מחלות זיהומיות, PCR היא השיטה הרגישה והספציפית ביותר לזיהוי ישיר של פתוגנים. זה מאפשר לא רק לבסס את האטיולוגיה של המחלה, אלא גם לשלוט על מהלך התהליך הזיהומי ולהעריך את יעילות הטיפול.

ניתוח של STIs על ידי PCR רלוונטי במיוחד במהלך האסימפטומטי של התהליך הזיהומי הנגרם על ידי מיקרואורגניזמים פתוגניים ללא תנאי ( כלמידיה, קביעה איכותית של DNA ; Mycoplasma, קביעה איכותית של DNA ; הגורם הסיבתי של זיבה, קביעה איכותית של DNA ; הגורם הסיבתי של טריכומוניאזיס, קביעה איכותית של DNA). כך למשל, בזיבה כרונית אצל נשים, גם בשיטה הבקטריולוגית, לרוב לא ניתן לזהות גונוקוק, למרות תסמינים של תהליך דלקתי כרוני בצוואר הרחם או בשופכה.

אבחון PCR מודרני מאפשר לא רק לזהות את החומר הגנטי של גורמים זיהומיים, אלא גם לקבוע את ריכוז ה-DNA / RNA שלהם (פורמט מחקר כמותי). קביעת מספר הפתוגנים חשובה בהחלטה אם לרשום טיפול, במיוחד אם מתגלים פתוגנים אופורטוניסטיים ( מיקופלזמה, כימות DNA ; הקלדת Ureaplasma, כימות DNA) .

אחד הכיוונים המרכזיים בפיתוח שיטת PCR הוא פורמט Multiprime שפותח ב-CMD, המאפשר לזהות מספר פתוגנים במבחנה אחת (ובתגובה אחת).

• גורמים סיבתיים של זיהומים המועברים על ידי קרציות ixodid

אבחון PCR של הפטיטיס

נכון להיום, ידועים לפחות 5 וירוסים, שיכולתם לגרום לנזק לכבד הוכחה. אלו הם הגורמים הגורמים לדלקת כבד A, B, C, D, E. במקרים נדירים, הפטיטיס עלולה להיגרם על ידי נגיפי אפשטיין-בר והרפס סימפלקס. היכולת להדביק את הכבד של גורמים כגון וירוסי TT והפטיטיס G אינה מוכרת על ידי כולם כיום. כל הנגיפים הללו שייכים למשפחות שונות, בעלי תכונות ביולוגיות שונות ובהתאם, גם טקטיקות הטיפול יהיו שונות באופן משמעותי בהתאם לאטיולוגיה של הפטיטיס.

בהתחשב באמור לעיל, בעיה דחופה מאוד היא אבחנה אטיולוגית נאותה של הפטיטיס ויראלית עם זיהוי של פתוגן ספציפי. זה בלתי אפשרי ללא שימוש בשיטות ביולוגיות מולקולריות מודרניות. לכן, אבחון הפטיטיס בשיטת תגובת שרשרת הפולימראז הוא אחד השלבים החשובים ביותר בביסוס הגורם למחלה וקביעת טקטיקות טיפול נוספות.

PCR באבחון זיהום ב-HIV

נכון להיום, לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV, נעשה שימוש בגישה הנגישה ביותר ובו זמנית הרגישה - איתור נוגדנים ל HIV באמצעות אנזים אימונואסאי (ELISA)- עם אישור לאחר מכן של תוצאות חיוביות של הניתוח על ידי אימונובלוטינג (IB). היעילות של זיהוי אנשים שנדבקו ב-HIV באמצעות גישה זו יכולה להגיע ל-99% או יותר.

אבל לאבחנה הסרולוגית של זיהום ב-HIV יש מספר מגבלות:

1. חוסר יעילות במהלך מה שנקרא. "חלון סרולוגי" (בשבועות הראשונים לאחר ההדבקה לא מתגלים נוגדנים עקב היעדרם או ריכוז נמוך).
2. נוגדנים ל-HIV מתגלים במשך זמן רב בכל הילדים שנולדו מאמהות נגועות ב-HIV.
3. תוצאות ELISA חיוביות כוזבות עקב נוכחות בדם של נוגדנים לאנטיגנים הדומים לאנטיגנים של HIV.
4. תוצאות כוזבות-שליליות ומפוקפקות של ELISA ואימונובלוטינג (במיוחד בחולים בשלב הסופני של המחלה).

לכן, ניתוחי PCR בבדיקת הידבקות ב-HIV נמצאים בשימוש יותר ויותר כיום. על פי "הנחיות לבדיקת הידבקות ב-HIV" (אושרה על ידי משרד הבריאות והפיתוח החברתי של הפדרציה הרוסית ב-6 באוגוסט 2007), "אם ישנם קריטריונים אפידמיולוגיים המצביעים על סיכון לאחרונה לזיהום ב-HIV עבור חולים, וכן, ב- במקביל, תוצאות חיוביות כוזבות או שליליות כוזבות ב-ELISA ו-IB, למשל, כאשר בודקים ילדים שנולדו לאמהות או חולים נגועים ב-HIV בתקופת "החלון הסרונגטטיבי", משתמשים בשיטת PCR, המזהה את הגן ל-HIV חוֹמֶר….." ובמקרה של אבחנה שכבר הוקמה של זיהום ב-HIV, ניתוח PCR משמש לפרוגנוזה, ניטור דינמי וניטור של טיפול מתמשך.

• נגיף כשל חיסוני אנושי קביעה איכותית של DNA פרו-וירוס, PCR
• כימת RNA של נגיף חיסוני אנושי, PCR
• אבחון מקיף: קביעה איכותית של RNA של נגיף הפטיטיס C / DNA של וירוס הפטיטיס B / נגיף כשל חיסוני אנושי (HIV) RNA מסוג 1 ו-2

במרכז לאבחון מולקולרי (CMD) ניתן לבצע בדיקת PCR ל-HIV באופן אנונימי.

מחלה מסוכנת המכונה בצדק "מגפת המאה העשרים ואחת". לכן מוציאים כספים ומשאבים אדירים על המאבק במחלה זו, כמו גם על המחקר שלה. העובדה היא שנגיף הכשל החיסוני עדיין לא מובן במלואו. תגליות חדשות מאפשרות למדענים לפתח חיסונים ו תרופותלהילחם בו. ברפואה המודרנית מוקדשת תשומת לב רבה לשיטות לאבחון מחלה זו. אחד ה דרכים יעילותזיהוי הנגיף, רופאים ברחבי העולם מזהים PCR. עבור HIV, שיטה זו מתבצעת באמצעות בדיקת DNA. מהו המחקר הזה, מהי מהימנותו וכיצד להתכונן לניתוח?

מהי בדיקת HIV - PCR?

קודם כל, יש לפענח את הקיצור הזה. תגובת שרשרת פולימראז (שיטת PCR ל-HIV) היא אבחון שלא מצא יישום נרחב ברפואה החופשית בארצנו. יש לכך מספר סיבות. אבל העיקר שמחקר כזה אינו זול. יחד עם זאת, היעילות שלו היא כשמונים אחוז, כאשר לבדיקת אנזים חיסונית ולספיגת חיסון יש אמינות גבוהה יותר. זה בין תשעים וחמישה לתשעים ושמונה אחוזים. באופן טבעי, ניתן לזהות HIV על ידי PCR. הוא משמש גם למטרות אחרות. בעזרת חקר DNA ו-RNA נקבעות מחלות גנטיות ותורשתיות, וכן מחלות זיהומיות וויראליות.

מהו PCR ל-HIV, שאמינותו, כאמור לעיל, היא רק שמונים אחוז, ומדוע קיבלה שיטת אבחון זו שם כזה? עבור סוג זה של מחקר, משתמשים במספר סוגים של חומר ביולוגי. זה בעיקר דם, אם אנחנו מדברים על נגיף הכשל החיסוני. כמו כן, כדי לבצע בדיקת HIV באמצעות PCR, משתמשים בהפרשות מאיברי המין. איברים נשייםוזרע. רוק במקרה זה אינו נבדק. כי זה לא יעיל. הרוק מכיל כמות קטנה של תאי וירוס. אותו הדבר ניתן לומר על שתן, זיעה ונוזל הדמעות.

האם HIV - PCR מזהה אנטיגן או לא? שאלה זו נשאלת לעתים קרובות על ידי אנשי מקצוע רפואיים. התשובה לכך לא יכולה להיות חיובית. בגלל ה השיטה הזאתאבחון מכוון לחקר DNA ו-RNA. PCR איכותי עבור HIV מתבצע ברצף מסוים. החומר הביולוגי הדרוש נלקח מהאדם הנגוע לכאורה. לרוב, דם ורידי נלקח למחקר כזה. אגב, לפני זה, לא מומלץ למטופל לאכול מזון שומני במשך מספר ימים. המחקר מתבצע על קיבה ריקה. חומר ביולוגי מונח בכור מעבדה מיוחד, שם הוא מפוצל. בנוסף, מוסיפים אנזימים מסוימים לחומר הביולוגי (לכל מחלה או לכל פתולוגיה הם שונים). על מנת לסנתז עותק של חיידק, וירוס או זיהום, אנזימים אלו נקשרים ל-DNA שלהם.

זה קורה בכמה שלבים לפי העיקרון של תגובת שרשרת. ראשית, ממולקולה אחת של חומצה דאוקסיריבונוקלאית מתקבלות שתיים, למה ארבע וכו'. בסיום מספר מחזורי מחקר, עוזר המעבדה מקבל מאות או אלפי עותקים של ה-DNA של החומר הנחקר, שבזכותם הוא יכול להשוות אותם בקלות עם ה-DNA של כל אורגניזמים פתוגניים, זיהומים ופתולוגיות ברמה הגנטית. כולל וירוס הכשל החיסוני. הודות למחקר זה, חולים יכולים לקחת PCR עבור HIV קודםאו הסוג השני. זה יכול לשמש גם כדי לקבוע את ריכוז תאי הנגיף בדם אנושי. אם PCR ל-HIV חיובי, אך לא קדמה לו בדיקת ספיגת מערכת החיסון או בדיקת ELISA, אזי החולה מופנה לסוגי מחקרים אלה. אם לתגובת שרשרת הפולימראז קדם אחד מסוגי המחקר לעיל, אז אין ספק בקרב מומחים בתחום הרפואה. במקרה זה, אדם מקבל אבחנה ספציפית. אם PCR עבור HIV שלילי, אך לרופאים עדיין יש ספקות, אזי ניתן לשלוח את החולה גם למחקרים נוספים. יש לציין כי תוצאה חיובית כוזבת במקרה של שיטת אבחון זו מתגלה לעתים קרובות יותר מאשר שלילית כוזבת. חשוב לדעת ש-PCR על ידי מריחה או גרידה ל-HIV אינו מבוצע.

היכן לבצע בדיקת דם PCR ל-HIV, והאם ניתן לעשות זאת בחינם?

כאמור, מחקר מהסוג הזהלא מאוד נפוץ ברוסיה. והסיבה לכך היא העלות הגבוהה שלו. זה מאפשר לנו להסיק שאי אפשר לבצע בדיקת PCR ל-HIV (האמינות של PCR ל-HIV מסוג 2 ו-1 זהה) במרפאה רגילה של המדינה. לשם כך, יהיה עליך לפנות למעבדה מיוחדת או למרפאה בתשלום. בערים גדולות ישנם מרכזי איידס מיוחדים בהם מתבצעות בדיקות PCR על בסיס מסחרי. בְּ הסדריםלא לכולם יש הזדמנות קטנה יותר, לא לכולם יש הזדמנות לעבור סוג זה של מחקר, עם זאת, תושבי מקומות כאלה תמיד יכולים לבקר בערים גדולות כדי לשים לב לבריאותם.

כמה זמן לקחת PCR עבור HIV לאחר ההדבקה לכאורה?

על כמה זמן לוקח לעבור PCR עבור HIV, הם שואלים לעתים קרובות מומחים בתחום הרפואה. במקרה זה, אין הבדל בין המחקרים. הן תגובת שרשרת הפולימראז והן בדיקת אימונובלוט ELISA צריכות להתבצע לא לפני שלושה עד ארבעה שבועות לאחר החשד לזיהום. לפני תקופה זו, המחקר אינו הגיוני. HIV לאחר 10 ימים PCR לא יגלה.

במקרים מסוימים, ניתן לזהות את הזיהום מוקדם או מאוחר מהתקופה שצוינה. אבל זה תלוי במאפיינים הספציפיים של האורגניזם הנחקר. חשוב לדעת שבאמצעות תגובת שרשרת הפולימראז ניתן לזהות לא רק נגועים, אלא גם נשאים של הנגיף. העיתוי של PCR עבור HIV תלוי במידה רבה במעבדה שבה מתבצעת האבחנה. בממוצע, הם לא יותר מיום. אבל יש גם מחקר אקספרס, הכרחי לעירוי דם או ברפואת חירום.

תפקידו של PCR באבחון זיהום ב-HIV ביילוד

בדיקת PCR ל-HIV משמשת ביילודים כאשר לנשים נגועות יש ילדים. כולם יודעים שבמקרה זה הסיכון להעברת הנגיף מאם לילד הוא גבוה ביותר. כל הילודים שאמהותיהם נגועים או נשאים של נגיף הכשל החיסוני, בזמן הלידה, נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני כבר נמצאים בדם, ללא קשר אם התרחש זיהום או לא. בעזרת אבחון PCR ל-HIV, ניתן לגלות האם הם מה שנקרא הגנה מערכת החיסוןאו תוצאה של זיהום. בימים הראשונים לחייהם של תינוקות, סוג זה של מחקר אינו מבוצע. אחרי הכל, אם מתרחש זיהום במהלך הלידה דרך תעלת הלידה, אז הניתוח שבוצע מיד לא יוכל לזהות את המחלה. הוא יראה זאת רק אם הזיהום היה תוך רחמי. הדיוק של PCR עבור HIV ביילודים הוא גם כשמונים אחוז.