تجزیه و تحلیل کیفی برای HIV. آزمایش DNA برای HIV برای بزرگسالان و کودکان: ماهیت مطالعه، دامنه استفاده. تجزیه و تحلیل PCR برای HIV - چه زمانی باید آن را مصرف کرد، چرا و در چه بازه زمانی

یکی از مهمترین بیماری های جدیکه هنوز درمان نشده است، ناشی از ویروس نقص ایمنی انسانی است.

تشخیص یک پاتوژن در بدن آسان نیست: در حال حاضر، تنها چند روش تحقیق برای این مورد استفاده می شود.

یکی از این آزمایشات است واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR).

برای درک درستی روش واکنش زنجیره ای پلیمراز، باید ویژگی ساختار سلول ها را از دوره مدرسه به خاطر بسپارید.

هر سلول زندهحاوی پروتئین و دو نوع اسید نوکلئیک است: DNA و RNA. آنها مهمترین ساختارهای سلولی هستند زیرا حاوی اطلاعات ژنتیکیبه روشی خاص کدگذاری شده است.

کد DNA یک توالی دقیق از ریزساختارها است که یک زنجیره طولانی را تشکیل می دهد.

ارجاع!توانایی یک اسید نوکلئیک برای تولید مثل خود به عنوان پایه PCR استفاده می شود.

هنگامی که ویروس وارد سلول های سالم می شود، رشته های DNA را از بین می برد.

در این مورد، سلول دیگر شامل زنجیره های کامل نخواهد بود، بلکه فقط قطعات کوچک - نوکلئوتیدها را شامل می شود. علاوه بر این، حتی کوچکترین ذرات ویروس نیز قابل مشاهده خواهد بود.

روش واکنش زنجیره ای پلیمراز بر روی تشخیص زنجیره های DNA آسیب دیده و سلول های باقی مانده است.

دو نوع تشخیص PCR وجود دارد:

  • کیفیت. مناسب برای کسانی که تشخیص آنها تایید نشده است: به سادگی نشان می دهد که آیا ویروس در سلول ها وجود دارد یا خیر.
  • کمی. بیمار نتیجه "DNA ویروس شناسایی نشده است" را دریافت می کند که به معنای عدم وجود HIV یا اطلاعاتی در مورد وجود پاتوژن است که به این معنی است که فرد آلوده به HIV است.

اگر تشخیص تایید شده وجود داشته باشد، تجزیه و تحلیل کمی اختصاص داده می شود. با کمک آن، تعداد کپی های RNA (DNA) ویروس در خون (سلول ها) تعیین می شود. تجزیه و تحلیل کمی امکان ارزیابی اثربخشی درمان در افراد آلوده به HIV، تعیین شدت بیماری، پیشرفت آن را فراهم می کند.

چه روش های تشخیصی می تواند عفونت HIV را تشخیص دهد در این ویدئو توضیح داده شده است:

مزایا و معایب این روش تشخیصی

مانند هر روش تشخیصی، PCR نیز مزایا و معایب خود را دارد.

مزایای روش عبارتند از:

  • قابلیت اطمینان بالا.با PCR امکان شناسایی کوچکترین بقایای ویروس وجود دارد، احتمال تشخیص پاتوژن 4-5 روز پس از عفونت به 80٪، 100٪ - 14 روز پس از عفونت می رسد. بنابراین، بیشترین دقت هنگام مطالعه DNA یک ویروس در سلول های خونی به دست می آید: یک ویروس زمانی قابل تشخیص است که تعداد آن 1-5 کپی در هر 1 میلیون سلول باشد.
  • امکان استفاده از بیوموادهای مختلف(بزاق، ادرار، عرق و اشک برای PCR مناسب نیستند، اما می توان از خون، مایع منی و ترشحات تناسلی زنان استفاده کرد).
  • امکان انجام تجزیه و تحلیل بیماری های مختلف در یک آزمایش.با استفاده از PCR می توانید HIV، کلامیدیا، تبخال، سیتومگالوویروس، اورهاپلاسما، مایکوپلاسما، سوزاک، تریکومونازیس، توکسوپلاسموز را تشخیص دهید.
  • سرعت بالا در گرفتن نتیجه.یک معاینه اکسپرس PCR وجود دارد که به شما امکان می دهد در چند ساعت به نتایج تشخیصی پی ببرید.
  • حساسیت بالا PCR، بر خلاف، به عنوان مثال، ELISA، به شناسایی ویروس در هفته های اول پس از عفونت کمک می کند.
  • امکان حصول نتیجه در عرض چند روز پس از عفونت.هنگامی که آلوده می شود، ویروس را می توان پس از 5-14 روز تعیین کرد، در حالی که توصیه می شود ELISA تنها پس از 6 هفته انجام شود.
  • بدون محدودیت سنی PCR را می توان هم در بزرگسالان و هم در کودکان از لحظه تولد انجام داد.

ویژگی اصلی آنالیز PCR این است که آنتی بادی های ویروس را تشخیص نمی دهد، بلکه خود ویروس را تشخیص می دهد.

تنها چند معایب در برابر مزایا وجود دارد:

  • هزینه بالا.
  • احتمال به دست آوردن نتایج مثبت کاذب حدود 20 درصد است. معمولاً این اتفاق به دلیل تقصیر پرسنل (خطا در جمع آوری یا حمل و نقل بیومواد، در مطالعه بیومتریال و تفسیر نتایج) رخ می دهد.
  • نیاز به استفاده از تجهیزات پیشرفته با تکنولوژی بالا که فقط برخی از کلینیک ها به آن مجهز هستند.

توجه!بدیهی است که مزایای این تکنیک بسیار بیشتر از معایب آن است. به ویژه مهم است که با کمک PCR می توان بیماری را در مرحله اولیه توسعه تشخیص داد و درمان را به موقع شروع کرد.

نتیجه آنالیز PCR می تواند 14-21 روز پس از عفونت احتمالی مثبت باشد. اما اگر تجزیه و تحلیل منفی باشد، این عدم وجود عفونت را تضمین نمی کند. بهتر است بعد از ۲ هفته آزمایش تاییدی با عسل الایزا انجام شود.

نحوه انجام آزمایش PCR برای HIV در ویدیو توضیح داده شده است:

چه کسی تعیین شده است؟

اول از همه، PCR برای مشکوک به HIV تجویز می شود. این تکنیک همچنین می تواند برای تشخیص بیماری های مقاربتی، بیماری های ارثی نشان دهنده باشد.

ارجاع!تشخیص PCR اغلب توسط فردی شروع می شود که علائم بیماری را نشان نداده است، اما حدس و گمان و نگرانی در مورد عفونت احتمالی وجود دارد، به عنوان مثال، پس از آمیزش جنسی محافظت نشده، تزریق خون اخیر، تماس با فرد مبتلا.

معاینه به چه کسی دیگری نشان داده می شود؟

  • افرادی که دو بار تست الایزا مثبت شده اند. PCR به شما امکان می دهد تا تشخیص نهایی را ایجاد کنید.
  • اهداکنندگانی که قصد اهدای خون دارند.
  • افرادی که ایمونوبلات در آنها تشخیص را تایید کرد. ایمون بلات روشی برای تشخیص ایدز است و معمولاً همراه با PCR انجام می شود.
  • افرادی که در مرحله درمان بیماری های ناشی از HIV هستند. PCR به شما امکان می دهد اثربخشی درمان را ارزیابی کنید.
  • نوزادانی که مادرشان HIV مثبت است (انتقال ویروس در حدود 30 درصد موارد اتفاق می افتد). در حال حاضر 2-3 هفته پس از تولد، می توان تشخیص داد که آیا عفونت رخ داده است یا خیر.

برخی از افراد به عنوان یک اقدام پیشگیرانه غربالگری می شوند، اما این نادر است زیرا هزینه آزمایش PCR بالا است.

تجزیه و تحلیل چقدر طول می کشد و کجا می توانم آن را انجام دهم؟

آنالیز PCR برای HIV در آزمایشگاه انجام می شود.

خود نمونه گیری خون 5-10 دقیقه طول می کشد و نتیجه روز بعد آماده است.

هنگام انتخاب تشخیص سریع (به عنوان مثال، در آزمایشگاه های "Invitro" یا "Hemotest")، تفسیر نتایج توسط متخصص تنها 2 ساعت طول می کشد.

در کلینیک های خصوصی، تشخیص در صورت تمایل به صورت ناشناس انجام می شود. برای انجام این کار، باید این را در طی یک ویزیت شخصی گزارش دهید: به هر بیمار یک شماره سریال اختصاص داده می شود و به یک حساب شخصی دسترسی پیدا می کند. سپس فرد حتی بدون مراجعه مجدد به آزمایشگاه می تواند نتایج را دریابد.

قابلیت اطمینان نتایج مطالعه PCR در ویدیو توضیح داده شده است:

هزینه تحقیق

تشخیص PCR ارزان نیست، زیرا به تجهیزات پیشرفته خاصی و همچنین دانش تخصصی خاص نیاز دارد.

این تجهیزات فقط در برخی از آزمایشگاه های پزشکی موجود است که به شما امکان می دهد هزینه بالایی را برای تجزیه و تحلیل تعیین کنید.

میانگین قیمت یک مطالعه 3000-5000 روبل است. در برخی مناطق، هزینه از 1500-2000 روبل تجاوز نمی کند.

از آنجایی که احتمال نتایج مثبت کاذب و منفی کاذب وجود دارد، یا فرد خیلی زود اقدام کرده است (ویروس هنوز ساختار DNA را شکسته است، اما در حال حاضر در بدن وجود دارد)، ممکن است آزمایش دوم مورد نیاز باشد.

هزینه بالا همچنین به این دلیل است که تعدادی از اجزاء برای تشخیص مورد نیاز است:

  1. بخش DNA (ماتریس) در نظر گرفته شده برای تقویت؛
  2. دو پرایمر؛
  3. پلیمراز - یک جزء فعال شیمیایی که افزایش تعداد ذرات ویروسی را به صورت تصاعدی تسریع می کند.
  4. تری فسفات های دئوکسی ریبونوکلئوزید؛
  5. ذرات باردار منیزیم دو ظرفیتی؛
  6. یک محلول ویژه که در آن فرآیند پلیمریزاسیون انجام می شود. این محلول برای حفظ سطح مناسب اسیدیته، غلظت نمک، مقدار منیزیم در مایع طراحی شده است.

همچنین، این مطالعه به مقدار کمی ژله نفتی نیاز دارد: حاوی چربی و جوش در دمای بالا است که نمونه مورد مطالعه را از گرم شدن بیش از حد محافظت می کند.

انجام تحلیل

خون، مایع منی و ترشحات واژن برای آنالیز مناسب هستند. معمولا، اغلب از خون وریدی استفاده می کنند.

خونگیری در صبح با معده خالی انجام می شود.

علاوه بر این، شما باید برای تجزیه و تحلیل آماده شوید:

  • 2-3 روز قبل از تشخیص، غذاهای چرب باید از رژیم غذایی حذف شوند.
  • الکل 1-2 روز قبل از تجزیه و تحلیل حذف می شود.
  • 2 هفته قبل از تجزیه و تحلیل، باید مصرف داروهای تحریک کننده سیستم ایمنی را متوقف کنید.
  • آخرین وعده غذایی باید حداکثر 8 ساعت قبل از اهدای خون انجام شود.

هنگام گرفتن خون از ورید، خم داخلی آرنج با محلول خاصی درمان می شود، پس از آن متخصص پوست را سوراخ می کند، سوزن سرنگ ورید را قرار می دهد و مقدار مناسب خون را می گیرد. سپس سوزن برداشته می شود، محل دوباره با الکل درمان می شود، به بیمار یک سواب پنبه داده می شود.

بیمار باید به طور موقت دست را خم کند تا خونریزی متوقف شود. اگر فردی احساس خوبی داشته باشد، می تواند بلافاصله به خانه برود. با سرگیجه، حالت تهوع و غش به او کمک های اولیه می شود.

دستیار آزمایشگاه ماده زیستی به دست آمده را در یک فلاسک استریل قرار داده و برای تشخیص ارسال می کند. متخصص مواد بیولوژیکی تقسیم شده را در یک راکتور ویژه با آنزیم هایی که عفونت های مختلف را سنتز می کنند مخلوط می کند.

اگر ذرات ویروس بسیار کمی در خون وجود داشته باشد، تعداد آنها هنگام تعامل با آنزیم ها به شدت افزایش می یابد: معرف ها با DNA ویروس ترکیب می شوند و آن را تکرار می کنند.

تجزیه و تحلیل در چندین مرحله انجام می شود، زیرا تقسیم مولکول ها به صورت نمایی انجام می شود. از یک سلول 2، از 2 - 4 و غیره معلوم می شود.

با تجزیه و تحلیل نظرات و بررسی های پزشکان، می توان با اطمینان گفت: در حال حاضر، تشخیص PCR دقیق ترین روش برای آزمایش عفونت HIV است.

ارجاع!با استفاده از تجزیه و تحلیل، امکان وجود ویروس در بدن طی چند روز پس از عفونت وجود دارد، حتی اگر تعداد ساختارهای ویروسی تنها 1-5 واحد در هر میلیون سلول باشد. با این حال، کاستی های روش را فراموش نکنید، به عنوان مثال، احتمال به دست آوردن نتایج مثبت کاذب.

با این وجود، PCR یکی از معدود آزمایشاتی است که به شما امکان می دهد بیماری را به موقع تشخیص دهید و درمان را شروع کنید.

برای اکثر زنان و مردان، این بیماری مقاربتی بیشترین ترس را دارد. به همین دلیل، پس از یک رابطه صمیمی تصادفی بدون جلوگیری از بارداری مانع، و همچنین با تغییر مکرر شریک جنسی و پس از عمل جراحی، یک فرد منطقی هوشیاری خاصی را تجربه می کند. مطمئن ترین راه برای روشن شدن این موضوع مراجعه به کلینیک و انجام آزمایش PCR برای HIV است.

از آزمایش خون می توان برای تعیین شاخص های زیر استفاده کرد:

  • انکار / تایید وجود HIV در دوره نهفته (در هفته های اول پس از عفونت، آنتی بادی ها به دلیل عدم وجود یا غلظت بسیار کم در آزمایشات ELISA شناسایی نمی شوند).
  • تعیین ژنوتیپ HIV-1، HIV-2.
  • شناسایی وضعیت در کودکانی که از مادران ناقل متولد شده اند (آنتی بادی علیه HIV مدت زمان طولانیدر تمام کودکان متولد شده از زنان آلوده به HIV یافت می شود. تعیین DNA ویروس در کودکان زیر 48 ساعت زندگی، 1-2 ماه، 3-6 ماه مطلوب است.
  • نتایج منفی کاذب، مثبت کاذب و مشکوک آزمایشات الایزا.
  • تشخیص میزان HIV و نظارت بر تغییرات بار ویروسی در پویایی (در مورد تشخیص قبلاً ثابت شده ایدز، تجزیه و تحلیل PCR برای پیش آگهی، نظارت پویا و نظارت بر درمان در حال انجام استفاده می شود).

قیمت تست PCR برای HIV

مواد و روش ها نوع آنالیز PCR قیمت
DNA نوع 1 HIV کیفی 2 750
HIV نوع 1 RNA در پلاسما کمی 8 850
HIV RNA، تعیین مقاومت HIV به مهارکننده‌های پروتئاز و ترانس کریپتاز معکوس (به ترتیب با "HIV RNA در پلاسما") - 16 550
HIV RNA، آزمایش مقاومت HIV به مهارکننده‌های اینتگراز (به ترتیب با "HIV RNA در پلاسما") - 16 950
HIV-1 RNA/DNA، تعیین تروپیسم HIV - 16 950
مطالعه چند مرحله ای
RNA هپاتیت C + DNA هپاتیت B + RNA HIV نوع 1 و 2 (روش فوق حساس) کیفی 3 800

تجزیه و تحلیل PCR برای HIV - چه زمانی انجام می شود، چرا و در چه زمانی

  1. DNA HIV.تشخیص DNA ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV) می تواند برای تشخیص زودهنگام عفونت احتمالی پس از یک رویداد پرخطر استفاده شود (آزمایش های خون 10 روز پس از عفونت احتمالی انجام می شود). با این حال، برای حذف کامل عفونت، لازم است پس از آن یک مطالعه دوم و تشخیص ELISA در هفته های 4 و 12 انجام شود.
    نتایج تجزیه و تحلیل: DNA HIV ( تحلیل کیفی) - "یافت نشد" یا "پیدا شد". در مورد دوم، مطالعات اضافی مکرر برای تایید عفونت HIV مورد نیاز است. اگر نتیجه منفی باشد، اما خطر عفونت زیاد باشد، معاینه دوم مورد نیاز است - اهدای خون توسط PCR یا ELISA پس از مدتی.
  2. HIV RNAتعیین کمی RNA HIV توسط PCR (به اصطلاح "بار ویروسی") یکی از شاخص های ارزیابی پیش آگهی دوره عفونت HIV و اولین شاخص اثربخشی درمان ضد ویروسی است. این آزمایش برای نظارت بر روند بیماری، تصمیم گیری در مورد شروع درمان و ارزیابی اثربخشی آن توصیه می شود.
    مطالعه RNA HIV توسط PCR را می توان در بزرگسالان با تشخیص زودهنگام قابل اعتماد عفونت احتمالی پس از یک دوره پرخطر (تقریباً 10-7 روز پس از عفونت احتمالی) مورد استفاده قرار داد. وجود تیتر بالای HIV RNA در غیاب آنتی بادی ها امکان تشخیص عفونت حاد HIV را فراهم می کند. با این حال، برای روشن شدن تشخیص، لازم است یک مطالعه مکرر و تشخیص ELISA طی 1 و 3 ماه انجام شود.
    تحویل PCR HIV RNA در زنان باردار مبتلا به این عفونت 3-4 هفته قبل از تاریخ تولد مورد انتظار برای حل مشکل روش زایمان (از طریق کانال زایمان طبیعی یا با سزارین) اندیکاسیون دارد.
    نتایج تجزیه و تحلیل: HIV نوع 1 HIV RNA (تجزیه و تحلیل کمی)- "تشخیص نشد" (این طبیعی است).
  3. مقاومت HIVتجزیه و تحلیل برای تعیین مقاومت HIV در برابر پروتئاز و مهارکننده‌های ترانس کریپتاز معکوس برای بیماران مبتلا به HIV با درمان ناکارآمد، و همچنین در طول عفونت حاد قبل از شروع درمان ضد ویروسی نشان داده شده است. این مطالعه به شما امکان می دهد مقاومت HIV در برابر داروها را تعیین کنید. بر اساس نتایج تجزیه و تحلیل، متخصص بیماری های عفونی در مورد وجود جهش های مقاومت به مهارکننده های پروتئاز، مهارکننده های نوکلئوزیدی و غیر نوکلئوزیدی رونوشت معکوس، و همچنین اطلاعاتی در مورد هر موقعیت اسید آمینه مرتبط با جهش مقاومت دارویی می آموزد.
  4. تشخیص جامع Multiprime:تعیین کیفی RNA ویروس هپاتیت C / DNA ویروس هپاتیت B / ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV) نوع 1 و 2 RNA (روش فوق حساس). این تجزیه و تحلیل امکان تشخیص عفونت HIV، هپاتیت ویروسی C و B را فراهم می کند تاریخ های اولیه. این مطالعه برای تشخیص زودهنگام هپاتیت ویروسی B و C، HIV نوع 1/2 در افراد در معرض خطر نشان داده شده است. شناسایی ویروس های DNA یا RNA نشان دهنده عفونت است.

شرایط آمادگی این آزمایشات خون - از 3 تا 7 روزهای تقویم. برای تشخیص، تجزیه و تحلیل کمی و کیفی PCR را انجام دهید عفونت HIVدر مسکو در مرکز پزشکی ما امکان پذیر است. خونگیری روزانه از ساعت 10 تا 00 شامل

شرح

واکنش زنجیره ای پلیمراز (واکنش زنجیره ای پلیمراز، PCR، PCR) در سال 1983 توسط بیوشیمیدان آمریکایی کری بی. مولیس اختراع شد. در سال 1993 به خاطر این کشف جایزه نوبل را دریافت کرد.

امروزه زمینه های کاربرد PCR به عنوان روش مدرن زیست شناسی مولکولیبسیار گسترده تشخیص PCR در عمل پزشکی جایگاه ویژه ای دارد. و دلیل این امر کاملاً ساده است: واکنش زنجیره ای پلیمراز غیرممکن را ممکن می کند.

اغلب، تشخیص PCR به صورت مجازی به عنوان روشی توصیف می‌شود که با آن می‌توانید یک سوزن را در انبار کاه پیدا کنید و سپس پشته‌ای از این سوزن‌ها بسازید. "سوزن" قطعه کوچکی از ماده ژنتیکی سلول (DNA یا RNA) است.

بنابراین، کشف این روش یکی از برجسته ترین پیشرفت ها در زمینه زیست شناسی مولکولی در دهه های اخیر است. توسعه روش PCR به تشخیص پزشکی به طور کلی اجازه داد تا به سطح کیفی جدیدی ارتقا یابد.

مبانی PCR

اساس این روش کپی برداری انتخابی (تقویت) مکرر از یک منطقه DNA خاص به منظور به دست آوردن چنین مقدار ماده ژنتیکی است که برای تشخیص بصری کافی باشد. در این مورد، تنها یک ناحیه DNA معین به طور مکرر کپی (تقویت) می شود، مشروط بر اینکه در بیومتریال مورد مطالعه وجود داشته باشد.

علاوه بر این، این مطالعه، علاوه بر افزایش ساده تعداد کپی های بخش های DNA، امکان دستکاری های دیگری را با مواد ژنتیکی فراهم می کند. بنابراین، این روش به طور گسترده ای در تحقیق علمیعمل بیولوژیکی و پزشکی: در تشخیص بیماری های عفونی و ارثی، در تشخیص جهش، ژنوتیپ، تعیین پدری، شناسایی شخصی و غیره.

PCR در تشخیص بیماری های عفونی

امروزه تشخیص عفونت‌ها با PCR یکی از دقیق‌ترین، حساس‌ترین و مؤثرترین روش‌های آزمایشگاهی بالینی است. علاوه بر این، دامنه پاتوژن های قابل تشخیص عملا نامحدود است - یک سیستم آزمایشی برای تجزیه و تحلیل PCR از پاتوژن مورد نظر ایجاد می شود.

PCR به دلیل حساسیت بالایی که دارد، تشخیص پاتوژن را حتی با حداقل محتوای آن ممکن می سازد (یعنی فقط چند مولکول از DNA آن در بیومتریال مورد مطالعه وجود دارد).

PCR عوامل بیماری زا را شناسایی می کند بیماری های عفونیزمانی که با روش های دیگر (ایمونولوژیک، فرهنگی، میکروسکوپی) قابل انجام نباشد. بنابراین، برای تعدادی از عوامل عفونی، روش واکنش زنجیره ای پلیمراز به "استاندارد طلایی" تبدیل شده است، آن را با زمان آزمایش و آزمایش بالینی انجام داده است. در تشخیص آزمایشگاهی مدرن بیماری های عفونی، PCR حساس ترین و اختصاصی ترین روش برای تشخیص مستقیم عوامل بیماری زا است. این نه تنها امکان تعیین علت بیماری، بلکه همچنین کنترل روند عفونی و ارزیابی اثربخشی درمان را فراهم می کند.

تجزیه و تحلیل STIs توسط PCR به ویژه در سیر بدون علامت فرآیند عفونی ناشی از میکروارگانیسم های بیماری زا بدون قید و شرط مهم است. کلامیدیا، تعیین کیفی DNA ; مایکوپلاسما، تعیین کیفی DNA ; عامل سوزاک، تعیین کیفی DNA ; عامل ایجاد کننده تریکومونیازیس، تعیین کیفی DNA). به عنوان مثال، در سوزاک مزمن در زنان، حتی با استفاده از روش باکتریولوژیک، با وجود علائم یک فرآیند التهابی مزمن در دهانه رحم یا مجرای ادرار، اغلب نمی توان گونوکوک را تشخیص داد.

تشخیص مدرن PCR نه تنها به شناسایی مواد ژنتیکی عوامل عفونی، بلکه همچنین تعیین غلظت DNA / RNA آنها (فرمت تحقیق کمی) اجازه می دهد. تعیین تعداد پاتوژن ها در تصمیم گیری برای تجویز درمان مهم است، به خصوص اگر پاتوژن های فرصت طلب شناسایی شوند. مایکوپلاسما، کمیت DNA ; تایپ اورهاپلاسما، تعیین کمیت DNA) .

یکی از مسیرهای اصلی در توسعه روش PCR، فرمت Multiprime است که در CMD توسعه یافته است، که تشخیص چندین پاتوژن را در یک لوله آزمایش (و یک واکنش) ممکن می‌سازد.

PCR تشخیص هپاتیت

در حال حاضر حداقل 5 ویروس شناخته شده است که توانایی آنها در ایجاد آسیب کبدی به اثبات رسیده است. اینها عوامل ایجاد کننده هپاتیت A، B، C، D، E هستند. در موارد نادر، هپاتیت می تواند توسط ویروس های اپشتین بار و هرپس سیمپلکس ایجاد شود. امروزه توانایی آلوده کردن کبد به عواملی مانند ویروس TT و هپاتیت G توسط همه افراد شناخته نشده است. همه این ویروس ها به خانواده های مختلف تعلق دارند، خواص بیولوژیکی متفاوتی دارند و بر این اساس، تاکتیک های درمانی نیز بسته به علت هپاتیت به طور قابل توجهی متفاوت خواهد بود.

با توجه به موارد فوق، یک مشکل بسیار فوری، تشخیص علت شناسی کافی هپاتیت ویروسی با شناسایی یک پاتوژن خاص است. این امر بدون استفاده از روش های بیولوژیکی مولکولی مدرن غیرممکن است. بنابراین تشخیص هپاتیت با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز یکی از مهمترین مراحل در تعیین علت بیماری و تعیین تاکتیک های درمانی بعدی است.

PCR در تشخیص عفونت HIV

در حال حاضر، برای تشخیص آزمایشگاهی عفونت HIV، در دسترس ترین و در عین حال حساس ترین رویکرد استفاده می شود - تشخیص آنتی بادی های HIV با استفاده از آنزیم ایمونواسی (ELISA)- با تایید بعدی نتایج مثبت آنالیز توسط ایمونوبلات (IB). کارایی شناسایی افراد آلوده به HIV با استفاده از این روش می تواند به 99 درصد یا بیشتر برسد.

اما تشخیص سرولوژیک عفونت HIV دارای تعدادی محدودیت است:

  1. ناکارآمدی در طول به اصطلاح. "پنجره سرولوژیکی" (در هفته های اول پس از عفونت، آنتی بادی ها به دلیل عدم وجود یا غلظت کم آنها شناسایی نمی شوند).
  2. آنتی بادی های HIV برای مدت طولانی در تمام کودکان متولد شده از مادران آلوده به HIV شناسایی می شوند.
  3. نتایج ELISA مثبت کاذب به دلیل وجود آنتی بادی در خون آنتی ژن های مشابه آنتی ژن HIV است.
  4. نتایج منفی کاذب و مشکوک الایزا و ایمونوبلات (به ویژه در بیماران در مرحله پایانی بیماری).

بنابراین، تجزیه و تحلیل PCR در معاینه عفونت HIV امروزه به طور فزاینده ای مورد استفاده قرار می گیرد. با توجه به "توصیه های روش شناختی برای آزمایش عفونت HIV" (تصویب شده توسط وزارت بهداشت و توسعه اجتماعی فدراسیون روسیه در 6 آگوست 2007)، "اگر معیارهای اپیدمیولوژیک وجود داشته باشد که نشان دهنده خطر اخیر ابتلا به HIV برای بیماران باشد و در عین حال نتایج مثبت یا کاذب کاذب در ELISA و IB، به عنوان مثال، هنگام معاینه کودکان مبتلا به HIV در بیماران مبتلا به ویروس HIV وجود داشته باشد. از روش PC استفاده می شود که در آن ماده ژنی HIV شناسایی می شود...». و در مورد تشخیص قبلی عفونت HIV، از آنالیز PCR برای پیش آگهی، نظارت پویا و نظارت بر درمان در حال انجام استفاده می شود.

در مرکز تشخیص مولکولی (CMD)، می توانید آزمایش PCR برای HIV را به صورت ناشناس انجام دهید.

بیماری خطرناکی که به شایستگی آن را «طاعون قرن بیست و یکم» می نامند. به همین دلیل است که بودجه و منابع هنگفتی صرف مبارزه با این بیماری و همچنین تحقیقات آن می شود. واقعیت این است که ویروس نقص ایمنی هنوز به طور کامل شناخته نشده است. اکتشافات جدید به دانشمندان اجازه می دهد واکسن و داروهابرای مبارزه با او در طب مدرن به روش های تشخیص این بیماری توجه زیادی می شود. یکی از مهمترین راه های موثربا تشخیص ویروس، پزشکان در سراسر جهان PCR را تشخیص می دهند. برای HIV، این روش از طریق آزمایش DNA انجام می شود. این مطالعه چیست، پایایی آن چقدر است و چگونه می توان برای تجزیه و تحلیل آماده شد؟

آزمایش HIV - PCR چیست؟

اول از همه، این مخفف باید رمزگشایی شود. واکنش زنجیره ای پلیمراز (روش PCR برای HIV) یک تشخیصی است که در کشور ما در پزشکی رایگان کاربرد وسیعی پیدا نکرده است. دلایل متعددی برای این امر وجود دارد. اما نکته اصلی این است که چنین تحقیقاتی ارزان نیست. در عین حال، کارایی آن تقریباً هشتاد درصد است، زمانی که ایمونواسی آنزیمی و بلات ایمنی دارای قابلیت اطمینان بالاتری باشند. از نود و پنج تا نود و هشت درصد است. به طور طبیعی، تشخیص HIV با PCR امکان پذیر است. همچنین برای مقاصد دیگر استفاده می شود. با کمک تحقیقات DNA و RNA بیماری های ژنتیکی و ارثی و همچنین بیماری های عفونی و ویروسی مشخص می شود.

PCR برای HIV چیست که پایایی آن همانطور که در بالا ذکر شد تنها هشتاد درصد است و چرا این روش تشخیصی چنین نامی پیدا کرد؟ برای این نوع تحقیقات از چندین نوع ماده بیولوژیکی استفاده می شود. اگر در مورد ویروس نقص ایمنی صحبت کنیم، این در درجه اول خون است. همچنین برای انجام آزمایش HIV به روش PCR از ترشحات اندام تناسلی استفاده می شود. اندام های زنانهو اسپرم بزاق در این مورد بررسی نمی شود. چون ناکارآمد است. بزاق حاوی مقدار کمی از سلول های ویروسی است. همین را می توان در مورد ادرار، عرق و مایع اشکی نیز گفت.

آیا HIV - PCR آنتی ژن را تشخیص می دهد یا خیر؟ این سوال اغلب توسط متخصصان پزشکی پرسیده می شود. پاسخ به آن نمی تواند مثبت باشد. از آنجا که این روشهدف تشخیص، مطالعه DNA و RNA است. PCR با کیفیت بالا برای HIV در یک توالی خاص انجام می شود. مواد بیولوژیکی لازم از فرد ادعا شده آلوده گرفته می شود. بیشتر اوقات، خون وریدی برای چنین مطالعه ای گرفته می شود. به هر حال، قبل از این، برای چند روز به بیمار توصیه نمی شود که غذاهای چرب بخورد. مطالعه با معده خالی انجام می شود. مواد بیولوژیکی در یک راکتور آزمایشگاهی ویژه قرار داده می شود و در آنجا تقسیم می شود. علاوه بر این، آنزیم‌های خاصی به مواد بیولوژیکی اضافه می‌شوند (برای هر بیماری یا برای هر آسیب‌شناسی، آنها متفاوت هستند) به منظور سنتز یک کپی از یک میکروب، ویروس یا عفونت، این آنزیم‌ها به DNA آنها متصل می‌شوند.

این در چندین مرحله با توجه به اصل یک واکنش زنجیره ای اتفاق می افتد. ابتدا از یک مولکول اسید دئوکسی ریبونوکلئیک دو مولکول، چرا چهار و غیره به دست می آید. پس از اتمام چندین چرخه تحقیق، دستیار آزمایشگاه صدها یا هزاران نسخه از DNA ماده مورد مطالعه را دریافت می کند که به لطف آنها می تواند به راحتی آنها را با DNA هر موجودات بیماری زا، عفونت و آسیب شناسی در سطح ژنتیکی از جمله ویروس نقص ایمنی مقایسه کند. با تشکر از این مطالعه، بیماران می توانند برای PCR استفاده کنند ابتدا HIVیا نوع دوم همچنین می توان از آن برای تعیین غلظت سلول های ویروس در خون انسان استفاده کرد. اگر PCR برای HIV مثبت باشد، اما قبل از آن بلات ایمنی یا غربالگری ELISA انجام نشده باشد، بیمار به این نوع مطالعات ارجاع داده می شود. اگر واکنش زنجیره ای پلیمراز با یکی از انواع تحقیقات فوق انجام شده باشد، در بین متخصصان رشته پزشکی تردیدی وجود ندارد. در این حالت به فرد تشخیص خاصی داده می شود. اگر PCR برای HIV منفی باشد، اما پزشکان هنوز شک دارند، می توان بیمار را برای مطالعات تکمیلی نیز فرستاد. لازم به ذکر است که نتیجه مثبت کاذب در مورد این روش تشخیصی بیشتر از منفی کاذب تشخیص داده می شود. مهم است بدانید که PCR با اسمیر یا خراش دادن برای HIV انجام نمی شود.

از کجا می توان آزمایش خون PCR برای HIV انجام داد و آیا می توان آن را رایگان انجام داد؟

همانطور که در بالا ذکر شد، تحقیق کنید از این نوعدر روسیه بسیار رایج نیست. و دلیل این امر هزینه بالای آن است. این به ما امکان می دهد نتیجه بگیریم که انجام آزمایش PCR برای HIV (قابلیت اطمینان PCR برای HIV نوع 2 و نوع 1 یکسان است) در یک کلینیک دولتی معمولی غیرممکن است. برای انجام این کار، باید با یک آزمایشگاه تخصصی یا یک کلینیک پولی تماس بگیرید. در شهرهای بزرگ مراکز تخصصی ایدز وجود دارد که در آنها آزمایشات PCR به صورت تجاری انجام می شود. که در شهرک هاهرکسی فرصت کمتری ندارد، هرکسی فرصت انجام این نوع مطالعه را ندارد، با این حال، ساکنان چنین مکان هایی همیشه می توانند از شهرهای بزرگ دیدن کنند تا به سلامت خود توجه کنند.

چه مدت پس از عفونت ادعایی PCR برای HIV انجام شود؟

در مورد اینکه چقدر طول می کشد تا PCR برای HIV انجام شود، اغلب از متخصصان در زمینه پزشکی می پرسند. در این مورد، هیچ تفاوتی بین مطالعات وجود ندارد. هم واکنش زنجیره ای پلیمراز و هم آزمایش الایزا ایمونوبلات باید زودتر از سه تا چهار هفته پس از عفونت مشکوک انجام شود. قبل از این دوره، مطالعه معنی ندارد. HIV بعد از 10 روز PCR آشکار نمی شود.

در برخی موارد، عفونت را می توان زودتر یا دیرتر از دوره مشخص شده تشخیص داد. اما بستگی به ویژگی های خاص ارگانیسم مورد مطالعه دارد. دانستن این نکته مهم است که با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز، می توان نه تنها آلوده، بلکه ناقلان ویروس را نیز شناسایی کرد. زمان انجام PCR برای HIV تا حد زیادی به آزمایشگاهی که در آن تشخیص داده می شود بستگی دارد. به طور متوسط، آنها بیش از یک روز نیستند. اما یک مطالعه اکسپرس نیز وجود دارد که برای انتقال خون یا در طب اورژانس ضروری است.

نقش PCR در تشخیص عفونت HIV در نوزادان

آزمایش PCR برای HIV در نوزادان زمانی که زنان مبتلا صاحب فرزند می شوند استفاده می شود. همه می دانند که در این صورت خطر انتقال ویروس از مادر به کودک بسیار زیاد است. تمام نوزادانی که مادرشان آلوده یا ناقل ویروس نقص ایمنی هستند، در زمان تولد، آنتی‌بادی‌های ویروس نقص ایمنی از قبل در خون وجود دارد، صرفنظر از اینکه عفونت رخ داده باشد یا نه. با کمک تشخیص PCR برای HIV، می توان مشخص کرد که آیا آنها به اصطلاح محافظ هستند یا خیر سیستم ایمنییا نتیجه عفونت در روزهای اول زندگی نوزادان، این نوع مطالعه انجام نمی شود. از این گذشته ، اگر عفونت در هنگام تولد از طریق کانال تولد رخ دهد ، تجزیه و تحلیل انجام شده بلافاصله قادر به تشخیص بیماری نخواهد بود. او آن را فقط در صورتی نشان می دهد که عفونت داخل رحمی باشد. دقت PCR برای HIV در نوزادان نیز تقریباً هشتاد درصد است.